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  使用指南

  GelMA水凝膠表面細(xì)胞培養(yǎng)（2D培養(yǎng)）

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  使用指南

  GelMA水凝膠內(nèi)部細(xì)胞培養(yǎng)（3D培養(yǎng)）
  

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  使用指南

  GelMA水凝膠溶液制備。
  

HAMA水凝膠使用常見問題

甲基丙烯?；该髻|(zhì)酸（HAMA）具有大量的羧基及羥基，為化學(xué)改性提供了豐富化學(xué)位點(diǎn)，例如引入粘附基團(tuán)、藥物/活性因子的嫁接等。EFL團(tuán)隊研制的HAMA具有可見光固化和良好的生物兼容性的特點(diǎn)，已被應(yīng)用于許多生物醫(yī)藥研究領(lǐng)域，包括：軟骨細(xì)胞培養(yǎng)及軟骨再生修復(fù)、腫瘤模型構(gòu)建、高強(qiáng)度及粘附性水凝膠構(gòu)建、藥物控釋、微針制備、傷口敷料、生物傳感器、術(shù)后防粘連等。為了幫助用戶更好的使用EFL-HAMA系列水凝膠產(chǎn)品，EFL團(tuán)隊現(xiàn)整理HAMA水凝膠使用相關(guān)的高頻問題如下，可供參考。

• Q1：EFL-HAMA-150K和EFL-HAMA-400K有什么區(qū)別？
  答：①HAMA-150K 分子量是150KDa，HAMA-400K的分子量是400KDa。②同等條件下，400K的溶液要比150K黏稠很多，150K固化后的水凝膠強(qiáng)度比400K大，但水凝膠質(zhì)地要比400K脆，400K更韌一些。
• Q2：HAMA怎么保存
  答：干態(tài)套裝：室溫，3個月；4℃，12個月；-20℃，18個月。無菌溶液：4°C避光，7天；-20℃避光，6個月。
• Q3：為什么5%（w/v）HAMA-150K不到1h就溶解好了，但2%（w/v）HAMA-400K半天都溶解不了呢？
  答：HAMA-400K的分子量相對較大，溶解速度回相對慢很多，溶解過程中需要磁力攪拌促溶。2%（w/v）HAMA-400K溶液的會很粘稠，完全溶解后的液體黏稠度也要比5%（w/v）HAMA-150K高很多，正常磁力攪拌溶解，可以在1-2h完全溶解。您如果2%（w/v）HAMA-400K半天都溶解不了，可能有以下原因：①很是沒有正確使用磁力攪拌器溶解，配制液體過少，未能沒過轉(zhuǎn)子；單次整塊材料溶解，未將材料分解成小塊分批投放溶解，材料體積過大，導(dǎo)致材料表面溶解形成一層粘稠膠層，液體不易浸入，從而使材料糖心化，導(dǎo)致溶解速度減緩。②溶解過程中未在容器外包裹鋁箔紙避光，HAMA的凝膠點(diǎn)很短，微弱365-405nm波段的光即可使其發(fā)生部分交聯(lián)，溶解過程中應(yīng)避免陽光照射或長時間暴露在燈光下，避免溶解過程中表層已溶解的材料凝膠化從而影響材料的進(jìn)一步溶解。
• Q4：HAMA水凝膠溶液有哪些滅菌方式？
  答：①HAMA屬于多糖類，性能比較穩(wěn)定。常用使用0.22um濾膜過濾除菌即可。②如果使用的濃度較高，或者不想過濾除菌，可以使用巴氏除菌法，也可配制成需要的溶液濃度后使用121度高溫高壓20min除菌，但從放入滅菌鍋到滅菌結(jié)束全程最好不要超過3h，避免持續(xù)性高溫使分子鏈明顯發(fā)生斷裂，從而影響固化效果。③不可直接將材料置于紫外下照射滅菌，亦引發(fā)材料交聯(lián)，導(dǎo)致材料溶解性能不佳。PS:固化后的水凝膠支架可以輻照滅菌，性能不受明顯影響。
• Q5：HAMA分子上有哪些功能基團(tuán)？我想做進(jìn)一步改性，如接枝藥物等。
  答：HAMA分子上含有大量羧基和羥基官能團(tuán)，其中羧基最常用于功能化修飾，可通過酯化或酰胺化反應(yīng)偶聯(lián)特定分子。
• Q6：您好，我用HAMA制備微針，想把針尖和襯底區(qū)分開，應(yīng)該怎么拍照呢？
  答：如果是用相機(jī)或顯微鏡明場拍實物圖，可以使用不同顏色的染料對水凝膠進(jìn)行染色,使水凝膠結(jié)構(gòu)更具辨識度。EFL已推出防擴(kuò)散水凝膠染料（貨號：EFL-DYE-ND），有紅、綠、藍(lán)、黃、紫五種顏色可供選擇，有良好的防擴(kuò)散能力，可視化呈現(xiàn)不同的水凝膠形態(tài)，分別對制備針尖和襯底的材料進(jìn)行染色即可。如果是想拍熒光圖，可以使用烯類偶聯(lián)熒光染料（貨號：EFL-DYE-UF-ENE系列）給HAMA穩(wěn)定標(biāo)記上不同顏色的熒光，分別制備針尖襯底即可。
• Q7：做不同方向的應(yīng)用，應(yīng)該怎么選擇用哪種型號的HAMA呢？
  答：一般做投影式光固打印或雙光子精加工成形用EFL-HAMA-150K較好，使用濃度在5%-10%（w/v）。擠出打印兩個型號的HAMA均可以，但需復(fù)合其他材料一起打印，具體選擇按需求測試。單純做3D細(xì)胞培養(yǎng)用EFL-HAMA-400K會比較好，使用濃度在0.5~2%（w/v），其中用0.5%-1%（w/v）居多。制作噴霧薄層可選EFL-HAMA-150K。制作創(chuàng)口敷料、預(yù)交聯(lián)可注射水凝膠、涂層等優(yōu)選EFL-HAMA-400K。制備水凝膠微針優(yōu)選EFL-HAMA-150K，操作更簡單，常用5%（w/v）的濃度（微針制備教程）。其他應(yīng)用需求可參考產(chǎn)品理化性能介紹，按需選擇合適的型號和使用濃度進(jìn)行測試。
• Q8：細(xì)胞是不是沒法在光固化后的HAMA上貼壁生長？有解決辦法嗎？
  答：HAMA表面沒有細(xì)胞粘附位點(diǎn)，所以細(xì)胞沒辦法在HAMA水凝膠表面粘附貼壁。您可以按需進(jìn)一步進(jìn)行改性，在HAMA上接RGD肽，也可以選擇直接采購EFL在售產(chǎn)品丙烯?；疪GD肽（貨號：EFL-Pep-RGDfKAC），可直接將RGD肽以光交聯(lián)的形式穩(wěn)定接到HAMA上，可直接提升材料的細(xì)胞粘附性能，免去您合成改性的時間。
• Q9：HAMA在組織表面的粘附性能怎么樣？我想用HAMA當(dāng)做膠水替代手術(shù)縫合可以嗎？
  答：高分子量的HAMA溶液很黏稠，涂布在損傷的組織表面有較好的附著性能，適合作為創(chuàng)口敷料。單純HAMA水凝膠，其固化后的水凝膠粘附性能和強(qiáng)度目前均達(dá)不到直接替代手術(shù)縫合線的要求。HAMA上有豐富的可改性基團(tuán)，可以進(jìn)一步改性做化學(xué)修飾，或結(jié)合其他材料一起構(gòu)建復(fù)合水凝膠，從而進(jìn)一步提高其作為粘合劑使用的粘附性能。
• Q10：HAMA表面沒有細(xì)胞粘附位點(diǎn)，那我可以用HAMA培養(yǎng)細(xì)胞微團(tuán)嗎？
  答：可以?？蛇x擇利用投影式光固化打印機(jī)（貨號：EFL-BP-86系列）直接打印出HAMA基帶有固定尺寸的球形凹槽結(jié)構(gòu)模版，在模版上接種目的細(xì)胞，細(xì)胞可自發(fā)落入球形凹槽中匯聚成團(tuán)生長，即可培養(yǎng)出尺寸規(guī)整的細(xì)胞微團(tuán)。